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高效液相色譜儀(HPLC)是應(yīng)用高效液相色譜原理，主要用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機(jī)化合物的儀器設(shè)備。它由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)...

在日常別離剖析工作中，反相色譜柱的正確運(yùn)用和維護(hù)十分重要，色譜柱運(yùn)用是否妥當(dāng)，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會(huì)下降柱效、縮短運(yùn)用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需留意下列問題，以維護(hù)色譜柱。(1)柱子在裝卸、替換時(shí)，動(dòng)作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng)，避免柱床產(chǎn)生空地。(2)假如儀器用來做慣例剖析，樣品種類有限，但剖析次數(shù)多，則不妨為每一類慣例剖析配置一根專用柱，這樣有助于延伸柱子的壽命。(3)避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械轟動(dòng)。溫度的忽然變化或者使色譜柱...

任何HPLC或UHPLC柱都是有試用壽命的。正確使用和維護(hù)色譜柱可以延長其使用壽命，有利于該方法的經(jīng)濟(jì)性。重要的是遵循*的色譜慣例，如適當(dāng)?shù)臉悠分苽洌悠窇?yīng)通過0.45µm的膜過濾器進(jìn)行高效液相色譜過濾，通過0.22µm的過濾器進(jìn)行超高效液相色譜過濾）；流動(dòng)相的適當(dāng)質(zhì)量/純度（例如，用于等度模式的等度級(jí)溶劑，用于梯度洗脫的梯度級(jí)溶劑）；過濾流動(dòng)相，發(fā)展良好的方法，具有足夠強(qiáng)的洗脫能力，以盡量減少非特定的吸附；與所選色譜柱兼容的溫度、pH值和最大背壓范圍...

先用正己烷-乙腈(99：1)以0.5ml/min的流速?zèng)_10倍柱體積，再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、異丙醇、甲醇、甲醇-水(50：50)沖柱子。以0.5ml/min的流速用30倍柱體積的pH11.0的氫氧化鈉(LUNA)水溶液沖柱子(注意pH值切不可超過11.0)，立即用水(0.5ml/min的流速，30倍柱體積)沖洗，再換成流動(dòng)相。配制流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)各組分分別量取，比例較小的組分要精密量取，需調(diào)pH值時(shí)要精密到0.1。反相條件下使用時(shí)，要特別注意控制pH值范圍，pH值越...

無論正在利用何種相互作用，液相柱色譜法都分六個(gè)步驟進(jìn)行：柱平衡樣品裝載洗滌洗脫清洗色譜柱再生一、柱平衡：大多數(shù)液相色譜方案從樹脂平衡步驟開始。與目標(biāo)蛋白質(zhì)和所選樹脂相容的緩沖液通過柱子。一種常見的做法是用5-10柱體積(CV)的平衡緩沖液平衡柱。例如，蛋白質(zhì)與疏水相互作用樹脂的結(jié)合在高離子強(qiáng)度下有效。在選擇平衡緩沖液時(shí)也要考慮目標(biāo)蛋白質(zhì)的特性，因?yàn)殡x子強(qiáng)度等緩沖液因素會(huì)受到蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的限制；通常，人們會(huì)避免使用會(huì)使感興趣的蛋白質(zhì)變性或阻止其與固定相相互作用的平衡緩沖條件。二...

許多用戶對(duì)溶劑梯度洗脫分離后LC色譜柱應(yīng)該重新平衡多長時(shí)間有疑問。在這里，我們展示了對(duì)于反相和HILIC分離而言，再平衡周期短的令人滿意的結(jié)果。LC用戶通常會(huì)提出和討論關(guān)于在溶劑梯度洗脫分離后重新平衡LC色譜柱多長時(shí)間的問題。在本文中，我們根據(jù)最近對(duì)該主題的研究討論了細(xì)節(jié)，并表明即使對(duì)于HILIC分離，在兩個(gè)柱體積數(shù)量級(jí)的短再平衡周期內(nèi)也可以獲得令人滿意的結(jié)果。一、核心概念在溶劑梯度洗脫模式下使用LC時(shí)，必須有一段時(shí)間，通常是在分析結(jié)束時(shí)，在溶劑梯度的第一部分中使用的流動(dòng)相流...